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技术知识

色谱柱清洗的基本原则和使用注意事项

发布时间: 2021-12-09 21:46   1065 次浏览
及时使用强流动相清洗色谱柱,特别是使用等度分析方法或者洗脱强度比较低的分析方法时,很容易积累强保留的化合物。
a.对于反相模式(如使用C18柱):
1).用高比例水相(如80%)冲洗色谱柱5-10个柱体积,以去除管路和色谱柱中的缓冲盐(如果体系没有使用缓冲盐可以省略这一步);
2).用高比例有机相(如80-90甲醇/乙腈等)冲洗色谱柱10-20个柱体积,必要的时候,可以使用更强的溶剂(如异丙醇或者含少量THF的异丙醇)清洗,再用推荐保存的流动相冲洗后保存。

b. 对于HILIC模式(如使用Diol柱):
1).用高比例水相(如50%的水,部分HILIC柱有水相比例的******限度,需要仔细阅读官方说明书)冲洗色谱柱10-20个柱体积,以去除管路和色谱柱中的缓冲盐,并清洗色谱柱;
2) .按照推荐保存的流动相冲洗后保存。

Comix系列混合模式色谱柱:
对于含有强碱性基团的固定相,如:



必须需要在弱酸性条件下使用和保存,因为强碱性基团会在硅胶表面形成强碱性环境而破坏硅胶基质。
对于含有酸性基团的固定相,如:


不可使用甲醇作为有机相,因为酸性基团与甲醇发生酯化反应而被改性(稀释剂中的少量甲醇影响可以忽略),特别要注意避免管路残留的甲醇被冲洗进色谱柱。
氨基柱:
1. 水相高的时候易发生固定相(氨丙基)水解而发生柱流失;
2. 氨基身会电离而产生强碱性环境而腐蚀硅胶,因此在弱酸性条件下稳定性更好;
3. 易与醛类化合物(如还原性糖:葡萄糖等) 、芳香羰基化合物发生席夫碱反应,而死吸附化合物并改性色谱柱,影响重现性:
4. 尽量保存在纯有机相中,以避免发生水解反应和自身电离产生强碱性条件而腐蚀硅胶。


 
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